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北京时代北利台式低温澳门新萄京网址3522如何提取与制备蛋白质

发布者:澳门新浦京8522com 发布日期:2018-7-27 17:36:43

 台式低温澳门新萄京网址3522是实验室最常见的必备仪器,今天由上海赵迪技术人员向大家先容台式低温澳门新萄京网址3522如何提取与制备蛋白质。
  
  蛋白质样品制备
  
  秧苗蛋白质样品的提取按Davermal等(1986)的方法进行。
  
  100mg材料剪碎后加入10mgPVP-40(聚乙烯吡咯烷酮)及少量石英砂,用液氮研磨成粉,加入1.5ml10%三氯乙酸(丙酮配制,含10mM即0.07%β-巯基乙醇),混匀,-20℃沉淀1小时,4℃,15000r/min离心15min,弃上清,沉淀复溶于1.5ml冷丙酮(含10mMβ-巯基乙醇),再于-20℃沉淀1小时,同上离心弃上清,(有必要再用80%丙酮(含10mMβ-巯基乙醇所得沉淀低温冷冻真空抽干。
  
  按每mg干粉加入20μl(可调)UKS液[9.5M尿素,5mM碳酸钾,1.25%SDS,0.5%DTT(二硫苏糖醇),2%Ampholine(AmershamPharmaciaBiotechInc,pH3.5-10),6%TritonX-100],37℃温育30min,期间搅动几次,28度(温度低,高浓度的尿素会让溶液结冰)16000r/min离心15min,离心力越大时间长一点越好!上清即可上样电泳。或者-70度保存
  
  植物根中蛋白质的抽取
  
  (1)sample,液氮研磨
  
  (2)装1.5mlcentrifuge用tube
  
  (3)加1MKH2PO4K2HPO4700ul
  
  (4)12000rpm,4度,10-15minite
  
  (5)取上层液,蛋白质就在里面

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